Ensayos de potencia de expresión de proteínas de la terapia génica Revolution

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A medida que la terapia génica continúa avanzando, la demanda de ensayos de potencia escalables, reproductivos y eficientes está aumentando rápidamente, especialmente para el vector del virus adeno-juda (AAV). El estancamiento de la expresión de transgen y la cantidad exacta de producción de proteínas funcionales es necesario no solo para cumplir con las expectativas regulatorias, sino también para garantizar una eficacia médica frecuente.

Los métodos tradicionales para las pruebas de potencia de AAV, como los puntos occidentales, ELISA y ensayos basados ​​en células, tienen mucha mano de obra y a menudo limitadas en sensibilidad y rendimiento. El sistema Leo ™, alimentado por la tecnología Simple Western ™, aborda estos límites con una plataforma ultra sensible totalmente automatizada que analiza 96 muestras en una sola ejecución de tres horas. A diferencia de las técnicas tradicionales, el gel Leo permite el estancamiento de la cantidad completa de expresión de proteínas sin electroforesis en gel, transferencia de membrana o tiempo de prueba tantificado por la transferencia manual y esfuerzo en las manos.

Cómo Leo está cambiando la prueba de potencia

Leo está diseñado para eliminar los desafíos generales de los ensayos de potencia con características importantes que respaldan tanto la investigación como el entorno de control de calidad:

• Alto rendimiento: procedimiento de hasta 96 muestras en solo tres horas, estableciendo un nuevo estándar para el análisis de proteínas de estilo occidental.
• Compatibilidad universal: todos los serotipos AAV y proteínas objetivo solo se requieren un anticuerpo válido.
• Sensibilidad excepcional: detecta proteínas de bajo bajo a nivel de picograma usando solo 3 μl de muestras.
• Automático y escalable: reduce las etapas manuales, reduce la variabilidad y admite estudios grandes y más eficientes.
• Copiar reportánica y cuantitativa: implica la normalización total de proteínas para resultados frecuentes y precisos.
• Vuelvo rápido: extender la fecha límite del desarrollo de productos, acelerar el análisis durante horas a horas.

Suficientemente sensible para detectar la diferencia de micro potencia

Las pruebas de potencia deben ser suficientes para detectar diferencias pequeñas pero significativas en la eficiencia de la transducción debido a las condiciones de estrés o una gran variabilidad de la liberación, que afectan directamente el cumplimiento regulatorio y la seguridad del paciente.

En un estudio que usa LEO, el lote AAV8 se incubó durante cinco días a 37 ° C, lo que ha demostrado menos en la expresión de GFP después de la transducción celular en comparación con los controles sin estanque (Figura 1AEl análisis de línea paralela (PLA) reveló una disminución de 0.4-0.5-12 en la potencia relativa en muestras estresadas (Figura 1B, panel izquierdoEstos resultados resaltan los efectos de la disminución inducida por el estrés, como la desamidación de los espárragos, y en varias circunstancias describen la necesidad de plataformas analíticas fuertes como LEO para monitorear la integridad del producto.

Detección confiable de la variabilidad de lote a logue

La variabilidad de fabricación en el desarrollo de la terapia génica es otra preocupación importante. Las diferencias microscópicas entre los lotes de producción pueden afectar la expresión de transgen, pero requieren ensayos altamente sensibles y reproductivos para detectar estas diferencias.

Leo se distingue claramente entre dos lotes AAV8, afirmando que el lote 2 era aproximadamente 1.9 veces más potente que 1 expresión general -general de proteína (aproximadamente 1.9 veces más potente (Figura 1B, panel derechoEl ensayo mostró su confiabilidad, que muestra una excelente copia con un coeficiente de variación del 6% o menos (CV), su credibilidad. En particular, el bajo requisito de muestra (3 µl) significa que estas ideas se obtienen con efectos mínimos sobre el rendimiento general del vector.

CompletEalization admite las expectativas del regulador

Aunque muchos ensayos de potencia se centran en cambios relativos, conocer la cantidad total de proteínas transgénicas (p. Ej., Ng/ml o FG/Cell) proporciona evidencia más directa de la eficacia del vector y respalda los criterios de aceptación mejor definidos y la evaluación de la reacción de dosis. Usando una curva estándar, LEO midió las concentraciones de proteínas de hasta 0.08 ng/ml (0.12 FG/célula). Según los datos de potencia relativa, la expresión estresada de muchas proteínas mostró menos y se mantuvo más poderosa que el lote 2 Lote 1 (Figura 1 C,

Una nueva era en la prueba de potencia

El sistema LEO proporciona una poderosa solución de alto contenido de uso de AAV para pruebas de potencia AAV que cruza los límites de los métodos tradicionales. Al combinar la automatización, los requisitos ultra logros y la precisión cuantitativa, LEO permite decisiones rápidas y más confiables en flujos de trabajo de investigación, desarrollo y fabricación.

Ya sea que respalde las pruebas de detección de fase inicial o de alivio por lotes finales, los genes LEO brindan una eficiencia inigualable e información sobre el área desarrollada de la terapia génica.

Conoce a Leo www.bio-techne.com/loo,