La nueva estrategia mejora la eficiencia de edición de CRISPR para uso médico

Si bien la edición genética de CRISPR ha llevado a un poderoso progreso en biología, medicina y agricultura, los desafíos continúan adaptándose a la eficiencia de edición de enzimas, como el núcleo Cas9 ampliamente utilizado. Esto es particularmente cierto en casos de uso médico, donde el objetivo es lograr altas tasas de edición a través de dosis de enzimas relativamente bajas y transitorias.

En un nuevo estudio publicado en Problema de abril de 2025 Diario CRISPR Tema, "Las horquillas en CRISPR-CAS9 aumentan la edición en indicaciones de localización atómica interna de los linfocitos humanos primarios, Investigadores de la Universidad de California (UC), Berkeley, del Innovador Instituto de Genómica (IGI), presenta una estrategia para mejorar la eficiencia de edición en células inmunes humanas para aplicaciones médicas aprovechando nuevas construcciones para las secuencias de indicaciones de localización atómica (NLS).

"La producción calificada de enzimas CRISPR es esencial para la traducción. Es un elemento que permite la rápida evaluación clínica de la primera edición de drogas de genoma del mundo. Profesor Asistente de Biología Molecular y Celular en UC Berkeley, Quien dirigió el nuevo estudio.

Wilson dijo: "Nuestro trabajo tiene como objetivo cerrar esta brecha al descubrir una forma de aumentar la densidad de NLS mientras mantiene la capacidad de producción de alta producción. Creemos que debería ser una victoria para el uso clínico", dijo Wilson. General,

Las variantes de ingenieros de enzimas CRISPR con diversas secuencias de NLS han mostrado éxito en la promoción de la localización nuclear y la edición eficiente de ADN. El estudio implementó un nuevo enfoque que instaló la secuencia de señal de localización atómica interna de horquilla (HINL) en sitios seleccionados dentro de la médula espinal de CRISPR-CAS9. Este enfoque es opuesto con una estrategia ampliamente adoptada para incluir secuencias NLS fusionadas terminales.

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El estudio evaluó la actividad de edición del genoma de las construcciones de HINLS utilizando dos métodos de distribución para enzimas de ribonucleoproteínas (RNP): electropología, una base para muchos ensayos clínicos y suministro de RNP competente en péptidos, una autonora de la OMS sin tener hardware libre de hardware, sin afeitar, sin disponibilidad de la OMS. In vivo Tecnologías de distribución.

RNP es un llamamiento al uso médico, ya que es naturalmente transitorio, lo que reduce el riesgo de edición y respuesta inmune de Toargate. Causas de 1 de RNP,Media vida de 2 días, las enzimas deben alcanzar rápidamente el núcleo para que pueda motivar la edición antes del metabolismo por la célula, de modo que se pueda entender el impacto de la densidad de NLS en la eficiencia de edición.

Los resultados del equipo de Wilson mostraron que las variantes HINLS Cas9 mejoraron efectivamente la eficiencia de edición en las células T primarias humanas, en comparación con las construcciones con secuencias NLS. Mejoraron significativamente una proteína en la proteína beta -2 -microglobulina (B2M), la presentación del antígeno y la respuesta inmune, y la cadena alfa del receptor de células T (TRAC), una proteína de señalización inmune importante para aumentar la capacidad de eliminación de proteínas.

Los autores declararon que la versatilidad que se muestra en varios genes objetivo resalta la fuerza y ​​los posibles efectos de traducción de estas hinales. Además, las construcciones de Hinls se pueden producir con alta pureza y rendimiento que sus contrapartes fundamentales, lo que puede respaldar la escalabilidad de fabricación.

Wilson dijo queEl trabajo trasero realizado en el laboratorio de su colega IGI, CRISPR Nobelarate, Jennifer Dodna, ha demostrado que el aumento de la densidad de NLS ha mejorado la capacidad de Cas9 para el autocontributo a las células. Como resultado, su equipo es En el proceso de evaluación del HINLS CAS9 para la capacidad de autocontribuir a varios contextos clínicamente relevantes. Wilson dijo que es "optimista" de que esto podría ser un beneficio adicional de estas construcciones que se han informado hasta la fecha.