Opciones de purificación AAV reduce los cuellos de botella en la producción

Los virus adeno (AAV) se usan en una docena de remedios innovativos de la FDA y más de 900 I + D. Proyectos Para distribuir la carga útil terapéutica a las celdas. Sin embargo, la producción masiva de AAV sigue siendo un obstáculo para la comercialización. Un nuevo proceso de tratamiento AAV simplificado que es universal y escalable reduce la obstrucción.

Después de aclarar los lisados ​​de células AAV, los científicos se utilizan para la purificación de cromatografía exclusiva de Stick (SXC) y cromatógrafo de intercambio de Aion (AEX) para la separación. Esto da como resultado altos niveles de recuperación de AAV y eliminación de fauxidad. Debido a que también elimina el requisito de concentración intermedia y intercambio de tampón, se requieren bajas etapas de procesamiento.

Frederick Meryx, los científicos de GmbH & Company de GMBH & Company de Fartoric Instruments, y sus colegas en Alemania y Estados Unidos, subrayaron el proceso recientemente. papelA medida que informan, optimice las condiciones de SXC utilizando la separación isocrática para separar las cápsidas AAV vacías y completas del lisado, capaz de recuperar el 51.7 por ciento del genoma viral. Esto redujo las impurezas de ADN en un 99.9 por ciento e impurezas de proteínas en un 99.8 por ciento.

"Este proceso bien organizado, universal y escalable ofrece una opción fuerte y eficiente para los procesos de refinación AAV tradicionales", dijo, "la terapia génica resuelve desafíos importantes en la producción de terapia". Este enfoque, gracias a su fácil truco para varios serotipos AAV, redujo las etapas de procesamiento y las tasas de recuperación del genoma comparables, ImmunOfinity parece bien implementado para aumentar la cromatografía, que actualmente es para la producción comercial de AAV, es un método de purificación popular.

Procesamiento escalable y universal

Para las operaciones comerciales, el proceso es escalable. Cuando la purificación aumentó de cuatro a 4, la recuperación del genoma disminuyó de aproximadamente 61 por ciento a 53 por ciento, mientras que la disminución del ADN de las células huésped aumentó de 98.1 por ciento a 99.7 por ciento. La versión de escala ganó una disminución en la proteína de las células huésped del 69.8 por ciento, mientras que en comparación con el 86.5 por ciento en el modelo antes de la ampliación. El trabajo entre uso mostró resultados comparables, que confirman la adaptabilidad de este método, la capacidad reproducida y la compatibilidad con muchos sistemas de procesamiento.

"El aislamiento basado en AX completa y las partículas de AAV vacías mejoraron aún más la pureza del producto y, en consecuencia, mejoró la plegado de 3.4 a 4.2 que contiene el genoma", dijo el equipo de Meerirs.

Además, este proceso de purificación se considera universal. Los científicos lo adaptaron con éxito a una variedad de serotipos AAV y genes de interés, incluidos AAV8-GFP y AAV5-GFP.

*Este documento también enumera concentraciones óptimas y tasas de flujo para cada una de las tres PEGS probadas, recuperación del genoma, deficiencia de ADN y estratificación de deficiencia de proteínas, así como la explicación a través del polaco también el rendimiento durante la fase.