La producción de HPSC está reduciendo el tiempo hasta el 66%

Las células madre pluripotentes humanas (HPSC) generalmente tardan entre 9 y 15 días en diferenciar las células endoteliales vasculares. En su más productivo, solo el 60% realmente se diferencia. Un nuevo método reduce ese tiempo a solo cinco días, proporciona una discriminación del 99% y, según los investigadores, es fácil y escalable.

El enfoque de dos pasos fue desarrollado por profesores de SCECAC, PhD, y Eric Shusta, PhD, profesores y colegas de ingeniería química y biológica de la Universidad de Viconsin-Madison. Se centra en sobreexpresar ETV2, HPSCS es un factor de transcripción para reanudar las células endoteliales. Luego, expanden las células endoteliales inducibles ETV2 (IETV2) en un medio endotelial.

"Nos sorprendió algo que un solo factor de transcripción, la expresión transitoria de ETV2, fue suficiente para generar una población homogénea de células endoteliales", dice Palasek. General. "La población de células madre a menudo es extraña, por lo que fue una sorpresa agradable ver que este proceso fue muy eficiente".

Procedimiento

Reciente papelLos escritores senior informan a Palasek y Shasta que, "al optimizar la densidad de cuentas y la composición media, logramos 99% CD31+ CD144+ IETV2-ECS puro en cinco días sin clasificar la célula". Las células diferenciadas eran comparables a las de la misma línea celular, que se diferenciaron usando los métodos de ancestros de mesodermas comunes. Los perfiles de expresión de jean, la capacidad de angiogenisitis, la utaza de lipoproteína de bajo grano acetilado y las reacciones de citocinas fueron todos similares.

"La capacidad de generar una población pura de células endoteliales sin podar aumenta la escala y reduce el tiempo y el costo", llamado Palasek. Agiliza el proceso de usarlos para desarrollar estos modelos vitro o terapia celular que implica la vascularización.

La primera fase de discriminación, que generó la expresión de ETV2 en HPSC genéticamente ingenieros, ocurrió en un medio basal sin factor de crecimiento o suero. Duró tres días.

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En la segunda fase, se eliminó la inducción ETV2 y las células endoteliales continuaron con resolución y "durante dos o más días extendidos a un medio HECSR sin suero en la matriz de colágeno IV".

Los científicos confirmaron la expresión y la morfología de importantes marcadores endoteliales en células diferenciales utilizando la citometría de flujo e ICC.

En estudios adicionales, encontró que las células endoteliales formadas a través de su método respondieron a los factores que inspiran la experiencia en las células endoteliales en el cerebro que son similares a las células endoteliales nativas.

Como dijo, en el cerebro, las células endoteliales y los ligandos Wnt secretados por el sistema nervioso central (SNC) son importantes para crear barrera hematoencefálica (BBB). BBB, a su vez, es importante en la regulación del transporte de drogas en el cerebro para el tratamiento de enfermedades neurodogeneradas.

Esta nueva tecnología, notas Pelsec, puede usarse para identificar factores involucrados en la especialización de células endoteliales ingenuas para células endoteliales específicas de tejido. Luego prepararemos protocolos para llevar a cabo la fabricación humana en modelos BBB in vitro para permitir el descubrimiento de fármacos y el modelado de enfermedades. "