T7-galactosa auto-xprtion para la producción de proteínas mejor lactosa

T7 rentable y fácil de usar es parte integral del sistema de expresión Escherichia coli Producción Desde su introducción en 1986. Ahora, un crecimiento justo del crecimiento lo hace aún mejor al mejorar los rendimientos de innumerables proteínas de reclutamiento, incluida el aumento de la proteína fluorescente verde (EGFP) y los citocromes humanos. do,

Un equipo dirigido por James Bosco, PhD, Asociado de Investigación, Fundador de la Universidad de Montana y Arcutos Life Sciences, recientemente Detallado Un medio de autoexpresión para maximizar la producción de proteínas. Bosco caldo, utiliza galactosa en lugar de lactosa para inducir auto-expresión.

En experimentos, el equipo informa el caldo de Bosco "aumenta los rendimientos para proteínas expresadas regularmente, una mejor expresión de citocromio humano do Adquirió una fuerte expresión automática en "y" dentro de un sistema de expresión dual FugasCorreas que producen proteínas con enlaces de disalfuro desafiantes. "También mostró" crecimiento reproductivo, 8 peates " Pizzona de estreptococo Cas9 (Spcas9) Rendimiento en 95% o más de pureza. ,

Bosco afirma que cuando se combina con la plataforma de producción patentada de Arctos, "Bosco Broth ... ha demostrado una mejora de la eficiencia de más de 20-12 para los estándares de la industria, cerca de 50-Guna", afirma Bosko General,

La investigación utilizó la fluorescencia en células para medir la producción de proteínas en comparación con la capacidad de producir proteínas contra otros cuatro caldos principales del caldo de Bosco. El rendimiento de proteína total en el caldo de Bosco fue de alta resolución de 175 mg/L frente a 40 mg/L o para otros cuatro caldo, admite una alta densidad e coli Cultivo celular y plegado eficientemente.

Intensificación de procesos impulsando la innovación en el diseño de medios

Capacidad de expresión dual

Para probar las capacidades del caldo de Bosco en un sistema de expresión dual, el equipo de Bosco eligió el modelo coexpresivo del citocromio humano do (Hu-Sitedo) Y el dobladillo de levadura se encuentran, que están codificados por los mismos plásmidos. Fue completamente exitoso en expresar la proteína de interés. (Los medios tradicionales tienen solo un 50-60% exitoso, dijo el equipo). Además, tres veces másdo La expresión estándar se produjo usando el caldo de Bosco cuando se usa protocolos. La actividad enzimática y la funcionalidad fueron comparables. El equipo atribuyó una productividad tan alta a "el alto número de células involucradas en la producción de proteínas y la expresión justa de ambas proteínas de interés".

Bosco SaFerba también hizo una proteína de interés de desanfado-cerebro utilizando Shafal T7 Express e coliAllí, la galactosa fue eficiente como IPTG en motivar EGFP.

"Es complicado porque el Shafal T7 no permite funcionar para la lactosa genética en cepas bacterianas, pero la galactosa en relación con la autoinducción", dice Bosco. "Este es un descubrimiento curioso, dado que no hay evidencia de que la galactosa pueda la luz de la luna en lugar de lactosa en rutas celulares que supervisan el metabolismo de la lactosa. Por mi conocimiento, y muchas otras personas, no se ha informado en ninguna parte de la literatura".

Las principales características del caldo de Bosco son la capacidad de apoyar cultivos de células bacterianas de alta densidad y producir proteínas a niveles más altos que los estándares de la industria. En general, los científicos lo consideran una opción más económica y más versátil que la lactosa.

Arktos está finalizando un acuerdo de licencia especial de la Universidad de Montana para comenzar a usar este método. Se está planeando más investigaciones para identificar el mecanismo de acción que conduce a una alta producción de proteínas solubles.