Freshpot Fresh Id'd para líneas celulares Cho más productivas

Aunque el ovario de humster chino (CO) ha dominado los sistemas de expresión de proteínas médicas en las células durante décadas, los biomanufactores aún deben lidiar con sus niveles de expresión inconsistente y diferente productividad. Un nuevo método desarrollado por los investigadores en Corea proporciona una forma de alrededor de los límites que generan líneas celulares con una productividad, eficiencia y estabilidad mucho mayor que las prácticas existentes que adquieren entre 2.2 y 15 veces mayor productividad específica relativa.

Dong-yup Lee, PhD y Seo-Young Park, PhD, ambos investigadores principales del Departamento de Ingeniería Química de la Universidad de Suungkikwan en Corea del Sur, y su equipo de la Universidad Sungkankwan y GC Biofarma, un A. desarrollado A. estructura Identificar los puntos críticos genómicos sistemáticamente, que permiten proteínas de alta superación (enzimas, anticuerpos monoclonales) en las células CHO.

"El crecimiento de la línea celular se puede simplificar aprovechando estas áreas de puntos de acceso mejorando la productividad y mejorando la estabilidad, eventualmente reduce la línea de tiempo y reduce los costos de la biomanudión", afirma Park General,

Aproveche los genes altamente expresados

En lugar de confiar en la integración de transi aleatoria, su método objetivo utiliza métodos de integración específicos del sitio "CRISPR/CAS9 y reconsumiendo los intercambios de cassette (RMCE), que para insertar adecuadamente los genes en el Loki genómico", dice el parque, "Parque, que respalda la expresión estable de alto nivel.

Él dice que el enfoque general dice "identificar sistemáticamente los puntos calientes genómicos en las células CHO con más de 200 bases de datos de ARN-CQ a todo el análisis del jeanoma con datos de transcriptom, lo que potencialmente aumenta el rendimiento de las proteínas", dice.

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Los loci con características favorables se identificaron "sobre la base de su proximidad y asociación con genes endógenos extremadamente expresados". Se utilizaron tres enfoques de integración específicos: incorporar los genes de interés en las áreas de floking dentro de los 20 kb de un gen altamente expresado; Dirigirse a áreas intergónicas cerca del grupo de genes frecuentes expresados; O seleccionar áreas de intrón mayores de 10 kb dentro de los genes altamente expresados. Estos puntos críticos fueron elegidos debido a su capacidad para mantener una fuerte funcionalidad en diversas situaciones de cultivo y entre varias líneas celulares Cho Pitru.

Park dice: "Los candidatos se filtraron para eliminar las variaciones estructurales, la pérdida de números y la eliminación de secuencias repetitivas", también considerando la secuencia de homeología dentro del genoma ", dice Park. Después de reducir el área para 20 puntos calientes de los candidatos, el equipo generalmente valoraba su efectividad.

Finalmente, Park dice: "Cinco puntos de acceso de alto rendimiento se validaron del grupo inicial de candidatos, que realiza niveles de expresión mucho mejores para la producción de enzimas y anticuerpos monoclonales en comparación con los sitios de inserción ya conocidos". Para promover aún más la productividad, los parques y colegas también sugirieron estrategias, como integrar varios puntos críticos o aumentar los genes de interés.

Esta tarea sugiere la importancia de los biomancucadores al seleccionar los puntos de inserción del gen como parte del desarrollo de la línea celular, la estabilidad transcriptal, la complejidad de la secuencia de ADN y la ubicación genómica.

El refinamiento futuro, dice Park, "Genómica operada por AI y análisis transcriptómico, y validado utilizando estos puntos críticos utilizando varias proteínas médicas para garantizar el fortalecimiento en varios contextos de producción, incluidos los sitios de inserción óptimos para garantizar el fortalecimiento en diferentes contextos de producción.